产品货号:
JN0015
中文名称:
Taq DNA聚合酶
英文名称:
Taq DNA Polymerase
产品规格:
500U|500U×5
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是94kDa的耐热性DNA聚合酶,是把Thermus aquaticus DNA Polymerase基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得到的。它与天然Taq DNA聚合酶具有相同的功能。使用本制品扩增得到的PCR产物的3'端附有一个"A"碱基,因此可直接克隆于T载体中。配以bjbalb独特配方的5×反应缓冲液(已添加Mg2+)可获得更加理想的扩增结果。
- 常规PCR鉴定;
- 小片段目标基因克隆;
- 平端PCR产物加A;
- 双脱氧法测序;
- 荧光定量PCR。
- 高效:以λDNA为模板,扩增长度可达8kb,可以高效扩增≤4kb片段。
- 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
- 高品质:完全满足Real Time PCR的实验要求。
- 独特配方的5×Buffer:使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、高效。
在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTPs的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。
组分 | 500U | 500U×5 |
Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 100μL | 100μL×5 |
dNTPs (10mM each) | 200μL | 200μL×5 |
5×Taq Buffer with Mg2+ | 1mL×2 | 1mL×10 |
保存:-20℃
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
- 使用本试剂扩增得到的PCR产物3'端有一突出"A"碱基,可直接克隆于T载体中。
- 扩增较长片段建议换用快速Pfu DNA聚合酶(货号:JN5006)。
- 2mM Mg2+可满足绝大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了保证较好的扩增,可调节为2~4mM。
- 体系中加入推荐的酶量,可以满足大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了得到较好的扩增,可适当增加酶量。
图1.50μL扩增体系中,以5ng λDNA为模板,对500bp~6.0kb的扩增结果。泳道M:1kb DNA Ladder Plus II;泳道1:0.5kb;泳道2:1.0kb;泳道3:2.0kb;泳道4:3.0kb;泳道5:4.0kb;泳道6:6.0kb。
- 常用反应体系(50μL)
注:Mg2+终浓度为2mM。成分 用量 5×Taq Buffer with Mg2+ 10μL 上游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2~1.0μM(终浓度) dNTPs (10mM each) 1μL 模板 1~50ng(质粒)
10ng~1μg(基因组)Taq DNA聚合酶(5U/μL) 0.5~1μL ddH2O 至50μL - 推荐PCR反应程序
- 当扩增片段<3K:
循环数 温度 时间 1 94℃ 90s 30 94℃ 20s 50~60℃ 20s 72℃ 1kb/60s 1 72℃ 5min 1 4℃ 保温 - 当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
循环数 温度 时间 1 94℃ 5min 30 94℃ 5s 68℃ 1kb/60s 1 72℃ 5min 1 4℃ 保温
- 当扩增片段<3K:
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